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    如何正确配置微生物发酵培养基

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    如何正确配置微生物发酵培养基

    发布日期:2019-06-20 00:00 来源:http://www.hbxdsw.com 点击:

        如何正确配置微生物发酵培养基">发酵培养基

        一、称取

    用精确度1/100的电子天平称取培养基所需药品。先根据配方计算出配制一定量培养基所需各种成分药品的量,然后用天平准确称取。称量时用称量纸折叠成簸箕状盛放药品。

    二、溶化

    培养基放入烧杯或搪瓷缸中,慢慢加入少量所需水,边加入边用玻棒搅拌。如果培养基中不含有琼脂,培养基不需要加热;如果含有琼脂,则需要用本生灯或电磁炉加热煮沸,完全溶解后,再补齐所需水,并搅拌均匀。如果配制的培养基量很大,可用不锈钢锅加热溶化,可先用温水加热并随时搅动,防止焦化,如有焦化现象,配制的培养基就不能使用,要重新配制。

    三、调pH

    虽然培养基中含有缓冲物质成分,能使培养基的pH尽可能的保持在要求的范围内,但是配出的培养基若不符合要求,就要进行必要的调整。

    四、过滤

    配成的培养基,若无特殊要求,可省略此步。若有沉淀或浑浊.需要澄清的。液体培养基可用油纸过滤。而固体培养基可用中间夹一薄层脱脂棉的双层纱布过滤。如果过滤法还不能达到澄清的要求,则可用蛋清澄清法,即培养基加热冷却到50~60℃,装入三角瓶内(不超过容量的二分之一),按1000mL加人1个~2个鸡蛋的蛋清,用力摇晃3-5min,高压蒸汽灭菌121℃、20min,取出趁热过滤即可。

    发酵培养基

    五、分装

    配制好的发酵培养基,根据不同的用途分装在三角瓶、试管等容器中,分装试管,如果试管量很大,可用自动分液器,如果试管量少,可用漏斗分装。分装量不超过容器容积的三分之二。三角瓶以不超过容积的二分之一为宜;琼脂斜面以不超过试管长度的五分之一为宜,灭菌后,摆成的斜面为培养基量的三分之一,底层为三分之二的量为宜;半固体琼脂分装量为试管长度的三分之一;用来接种或保菌的高层琼脂,分装量为试管长度的四分之一或三分之一,用来接种厌氧菌的要达到三分之二;琼脂平板,内径为90mm的以13mL~15 mL为宜,内径70mm的平板为8mL~10 mL,制成的琼脂平板若表面水分较多,可将平板倒扣,放置在37℃培养箱内30min,干燥后再用。每批培养基应另外分装一小玻璃瓶(约20mL)与该批培养基同时灭菌,为测定该批培养基最终pH

    六、灭菌

    分装好的培养基应立即进行灭菌。灭菌的方法种类如下:

    1、高压蒸汽灭菌法:大多耐热培养基都可用此法,小量分装时,用121℃,15min;灭菌量大时,用121℃,30min灭菌;含糖类的培养基只能113~115℃,15min灭菌,避免糖类遭破坏。

    2、煮沸灭菌法:对含有不耐高温物质的培养基,可使用此方法。

    3、过滤除菌:以过滤的方法除菌,用无菌操作技术,定量加入培养基。血液、抗生素可用无菌操作技术抽取,加入冷却到50℃左右的培养基中。培养基含有不耐热的物质时,可用此法。

    发酵培养基

    七、倒平板

    灭菌融化的培养基冷却到50℃后,倒入无菌干燥的培养皿中。培养基的温度不能过高,否则容易在培养皿的内盖上形成太多的冷凝水;温度太低,培养基又容易凝固成块,无法制成平板。倒平板时,应在靠近酒精灯火焰进行,以免外界的杂菌落入平板内,左手拿培养皿,右手拿三角瓶的底部,用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下,灼烧瓶口,用大拇指和食指把培养皿盖打开一条缝,至瓶口刚好伸入,倒入培养基,以铺满底为限,不超过培养皿高度的三分之一,迅速盖好盖,放在桌面上,轻轻地转动培养皿,使培养基分布均匀,冷凝后即可。

    八、摆斜面

    装在试管中的琼脂培养基,在灭菌完成后,趁热立即摆放在木棒(或玻璃棒)上,并成适当的斜度,冷却后,琼脂凝固即成斜面。斜面长度不用超过试管二分之一。

    九、质量检查

    发酵培养基灭菌后仔细检查一遍,发现有破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染,都要丢弃,不能再用。并测定其最终pH。还需进行无菌检查和效果检查。无菌检查是将灭菌后的培养基取1管(瓶)~2管(瓶),37℃恒温培养1d2d,确定无杂菌生长;效果检查是用标准菌株接种,在相关的培养基上检查检查菌的生长、形态及生化情况,与已知情况相符。两种情况都合格,配制的培养基方可使用。

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